Bakterien der Spezies Staphylococcus (S.) aureus sind von pathogener Art und können schwere Erkrankungen, sowohl gastrointestinaler, als auch extragastrointestinaler oder sogar systemischer Natur auslösen. In der vorliegenden Arbeit wurden gegen S. aureus gerichtete polyklonale Antikörper (pAk) hergestellt und unter Verwendung von biotinylierten pAk in einem Sandwich-Enzymimmuntest genutzt. Es wurde dadurch ein schneller und einfach durchzuführender Nachweis von S. aureus etabliert und charakterisiert.
Zunächst wurde eine gut beschriebene Stammsammlung an Staphylokokken-Isolaten und weiteren für die Lebensmittelsicherheit relevanten Keimen erstellt. Für das entwickelte enzymimmunologische Nachweisverfahren wurden pAk in Kaninchen gewonnen. Dafür wurden von vier S. aureus-Kulturen Keimpräparationen erstellt, diese mit Paraformaldehyd inaktiviert und für die Immunisierung von zwei Kaninchen genutzt. Diese gegen S. aureus gewonnenen Antiseren wurden gefällt und biotinyliert. In dem etablierten pAk-Sandwich-ELISA konnte eine Nachweisgrenze von 105 KbE/ml im nicht autoklavierten Ansatz bzw. 106 - 107 KbE/ml im autoklavierten Ansatz (121 ⁰C bei 2 bar für 20 min) realisiert werden. Es konnten im nicht autoklavierten Ansatz 120 von 127 (94,5 %) und im autoklavierten Ansatz 94 von 127 (74,0 %) der S. aureus-Isolate detektiert werden.
Um eine mögliche unspezifische Reaktion von SpA mit den produzierten IgG auszuschließen, wurde bei allen S. aureus-Kulturen mit einem EIA-Testsystem das SpA-Bildungsvermögen bestimmt und mit den Ergebnissen des pAk-S. aureus-ELISAs verglichen. Im nicht autoklavierten Ansatz konnte bei 118 von 127 S. aureus-Kulturen ein SpA-Bildungsvermögen dargestellt werden, wobei 98 % im pAk-S. aureus-ELISA positiv waren. Im autoklavierten Ansatz reduzierte sich der SpA-Nachweis auf 104 Isolate, hiervon waren 87,5 % im Sandwich-ELISA positiv. Es konnte eine Nachweisgrenze von 4 ng/ml mit einem chemisch modifizierten SpA erreicht werden. Zusätzlich wurde eine gute Detektion trotz sterischen Überlagerungen durch eine Absättigung mit unspezifischen Kaninchen-Immunserum erzielt.
Die Anwendbarkeit des entwickelten EIA-Testsystems für S. aureus wurde anhand künstlich kontaminierter UHT-Milch bzw. Rohmilchkäse überprüft. Es konnte eine Wiederfindungsrate von 100 % erreicht werden. Der Nachweis war, inkl. einer Voranreicherung von 18 h, innerhalb von 24 h möglich. Der in der vorliegenden Arbeit entwickelte Enzymimmuntest kann für den Nachweis von S. aureus, auch bei großen Probenmengen, verwendet werden und dadurch einen wichtigen Beitrag zur Verbesserung der Lebensmittelsicherheit in Bezug auf KPS leisten.
Aktualisiert: 2022-12-23
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